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彗星阐发一站式处置计划-专业彗星阐发试剂盒

宣布者:艾美捷科技宣布时辰:2021-02-01

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       由于情况身分和细胞内一般的推陈出新进程,DNA毁伤天天以每一个细胞1000到100万个份子毁伤的速率发生。固然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小局部,但关头基因的未修复毁伤能够会障碍细胞阐扬其功效的才能,并明显增添癌症的能够性。

 

彗星尝试

 

       彗星尝试(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳尝试(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超活络的单细胞程度上检测DNA毁伤的手艺,能够检测到1.657×10-15中0.1个DNA的断裂,乃至检出天然光照耀体外淋巴细胞1h后引发的DNA毁伤。在电泳场下,毁伤的细胞DNA(包罗碎片和链断裂)从完全的DNA中分手出来,在显微镜下构成典范的“彗星尾巴”外形。DNA毁伤的程度凡是是经由进程丈量彗星尾巴来目测的,也能够利用图象阐发软件来丈量各种参数。

 

      【彗星阐发利用范畴】:首要仍是在细胞凋亡的研讨,肿瘤/癌症研讨,毒理学研讨,情况净化监测,临床诊断与医治监测。

 

      上面就由小艾为您分享一下彗星阐发尝试(Comet assay)怎样做?

 

      《》First,挑选专业的彗星阐发试剂盒:

 

      按照您的尝试用量,能够挑选差别规格的产物:

 

产物称号 货号 规格 申明
Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)
(最经常利用)
STA-350 15 assays(5片) 彗星阐发试剂盒,3孔
STA-351 75 assays(25片)
STA-351-5 5*75 assays(5*25片)
Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)
(高通量挑选)
STA-355 96 assays(1片) 彗星阐发试剂盒,9孔
STA-355-5 5*96 assays(5片)

 

      * 每一个玻片外表都颠末特别处置,一旦电泳过,即便玻片上有未利用的孔,也不能用于第二次尝试。

      * 3孔和96孔玻片,均能够零丁采办,请征询艾美捷科技。

 

      艾美捷向您保举Comet Assay kit彗星阐发试剂盒内供给了彗星阐发所需的一切必需试剂,包罗裂解液、彗星阐发低熔点凝胶、DNA荧光染料、彗星阐发玻片和别的试剂。助您轻松实现彗星尝试阐发。

 

      【英文申明书】 后细心浏览哦~

 

      *(中文版申明书,已支配翻译中,敬请等候)

 

      【2020年最新颁发文章】

      Siemionow, M. et al. (2020). Transplantation of Dystrophin Expressing Chimeric (DEC) Human Cells of Myoblast/MSC Origin Improves Function in Duchenne Muscular Dystrophy Model. Stem Cells Dev. doi: 10.1089/scd.2020.0161.

      Lammert, C.R. et al. (2020). AIM2 inflammasome surveillance of DNA damage shapes neurodevelopment. Nature. doi: 10.1038/s41586-020-2174-3.

      Shibayama, Y. et al. (2020). Aberrant (pro)renin receptor expression induces genomic instability in pancreatic ductal adenocarcinoma through upregulation of SMARCA5/SNF2H. Commun Biol. 3(1):724. doi: 10.1038/s42003-020-01434-x.

      Han, J. et al. (2020). Elevated CXorf67 Expression in PFA Ependymomas Suppresses DNA Repair and Sensitizes to PARP Inhibitors. Cancer Cell. doi: 10.1016/j.ccell.2020.10.009.

      Hays, E. et al. (2020). The SWI/SNF ATPase BRG1 stimulates DNA end resection and homologous recombination by reducing nucleosome density at DNA double strand breaks and by promoting the recruitment of the CtIP nuclease. Cell Cycle. doi: 10.1080/15384101.2020.1831256.

      Ibnu Rasid, E.N. et al. (2020). Effect of Dioscorea hispida var. Daemona (Roxb) Prain & Burkill on Oxidative Stress and DNA Damage in the Liver of Pregnant Rats. Int J Biomed Sci. 16(3).

      Le, B.V. et al. (2020). TGFβR-SMAD3 Signaling Induces Resistance to PARP Inhibitors in the Bone Marrow Microenvironment. Cell Rep. 33(1):108221. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108221.

      Klotz-Noack, K. et al. (2020). SFPQ Depletion Is Synthetically Lethal with BRAFV600E in Colorectal Cancer Cells. Cell Rep. 32(12):108184. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108184.

      Ito, S.S. et al. (2020). Inhibition of the ATR kinase enhances 5-FU sensitivity independently of non-homologous end-joining and homologous recombination repair pathways. J Biol Chem. doi: 10.1074/jbc.RA120.013726.

      Klak, M. et al. (2020). Irradiation with 365 nm and 405 nm wavelength shows differences in DNA damage of swine pancreatic islets. PLoS One. 15(6):e0235052. doi: 10.1371/journal.pone.0235052.

      Khalil, A.M. et al. (2020). Association between Mobile Phone Using and DNA Damage of Epithelial Cells of the Oral Mucosa. J Biotechnol Biomed. 3(2020): 50-66. doi: 10.26502/jbb.2642-91280027.

      Wang, Y. et al. (2020). Targeting therapeutic vulnerabilities with PARP inhibition and radiation in IDH-mutant gliomas and cholangiocarcinomas. Sci Adv. doi: 10.1126/sciadv.aaz3221.

      Fang, Y. et al. (2020). Epigenetic dysregulation of Mdr1b in the blood-testis barrier contributes to dyszoospermia in mice exposed to cadmium. Ecotoxicol Environ Saf. 190:110142. doi: 10.1016/j.ecoenv.2019.110142.

 

      《》Second, 彗星阐发电泳形式挑选

 

电泳形式 检测范例 电泳时辰 申明
TBE电泳(中性电泳) 检测单链双链DNA的断裂 保举
10-15 mins
阐发细胞凋亡的首选方式,可利用尾巴长度而非尾矩停止数据阐发。
碱性电泳 检测单链双链DNA的断裂,AP位点毁伤在内的一切DNA 毁伤 保举
15-30mins
活络度最高!

 

      * 尝试进程中的各种缓冲液都须要4℃预冷。

 

      对于电泳电压:以上2种电泳形式,均保举参考您尝试室电泳槽南北极间的举例,按照1V/cm的规范设置电压。举例,若是电泳槽南北极举例是35cm,您须要利用35V的电压来履行电泳。

 

      尝试情况:为防止紫外线对细胞样品形成额定侵害,请在弱光前提下停止。

 

      《》Third,彗星阐发的典范成果款式

 

彗星阐发的典范成果款式

 

      如上图,左边是安康的Jurkat细胞(未处置);右边是利用20 uM Etoposide(依靠泊苷)处置4小时的Jurkat细胞。【电泳前提:碱性电泳,15mins】

 

      申明书或文献中的成果数据是不是能够作为我本身尝试的参考成果呢?

 

      这是一个很好的题目,也是问得最多的题目。但与ELISA差别,Comet Assay不供给对比,由于任何Comet Assay的成果都将按照尝试前提而变更。 比方,若是电泳运转前提差别,则包罗不异数目DNA毁伤的细胞的尾巴巨细能够会差别。 与咱们的成果或其余研讨职员的成果停止比拟将毫有意思,由于二者之间的前提永久不会不异。若是您有乐趣测试化合物对DNA毁伤的影响,倡议使一切前提在尝试之间坚持分歧,并利用不异的运转时辰和软件停止阐发。

 

      《》Fourth,彗星阐发成果计较

 

      经由进程丈量细胞核遗传物资(“彗头”)与发生的“尾巴”之间的位移,能够量化DNA毁伤。 尾矩(Tail Moment)和尾巴DNA%(Tail DNA% )是阐发彗星阐发成果的两个最罕见的参数。 每一个样品最少应阐发50 -100个细胞。斟酌到遗传物资的迁徙和尾巴中DNA的绝对数目,凡是倡议利用尾矩作为评价DNA毁伤的目标。

      

彗星阐发成果计较 Tail DNA% = 100 x Tail DNA 荧光强度/全部Cell DNA 荧光强度
尾矩(Tail Moment )能够利用以下方式之一停止丈量:
1. 橄榄尾矩(Olive Tail Moment)= Tail DNA% x Tail Monent Length (头中间与尾中间之间的长度)【左图下】
2. 延长尾矩(Extent Tail Moment) = Tail DNA% x Length of Tail【左图上】
倡议利用软件的保举参数停止丈量

     

      有不配套的彗星尝试成果阐发软件呢?

 

      这个还真有,小艾查阅了产物申明书,援用文献,已彗星阐发相干的颁发文章,发明有以下3种支流的软件可用(均有文献)。按照您的经历和需要停止挑选。

 

      *很遗憾,小艾也不亲身做过此类尝试,以是每次有小火伴求指点的时辰,咱们也很难堪,为了防止误导,只能极力供给相干材料给您浏览了。

 

软件称号 申明 链接
OpenComet 收费;是Image J软件的一款彗星阐发插件
CaspLab (CASP) 收费;自力软件
Comet Assay IV 付费软件;可试用1周

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      看到这儿,您心动了吗?顿时接洽小艾吧!

 

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      艾美捷科技与国际外优异的生物试剂供给商优坚持着紧密亲密的协作干系,今朝已成为浩繁国际着名品牌的中国总代办署理或一级代办署理,首要包罗:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Abbexa、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、ImmunoReagents、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene 、ProSpec、ProImmune、StressMarq、ScyTek 、SouthernBiotech、US Biological、Solis BioDyne等,能够在短时辰内为用户供给专业的前沿资讯、完整的产物及物流办事。